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技術文章

吡啰紅甲基綠染色液

點擊次數:545 發(fā)布時間:2013-11-13

1、原理與解析
(1)真核細胞的DNA主要分布在細胞核內,RNA主要分布在細胞質中。
(2)甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對DNA和RNA的親和力不同,甲基綠對DNA親和力強,使DNA顯現出綠色,而吡羅紅對RNA的親和力強,使RNA呈現出紅色。用甲基綠、吡羅紅的混合染色劑將細胞染色,可同時顯示DNA和RNA在細胞中的分布。
(3)鹽酸的作用
① 鹽酸能改變細胞膜的通透性,加速染色劑的跨膜運輸;
② 鹽酸使染色體中的DNA與蛋白質分離,便于DNA與染色劑的結合。
注意事項
1.材料的選擇
① 選用的實驗材料既要容易獲得,又要便于觀察;
② 常用的觀察材料由人的口腔上皮細胞、洋蔥鱗片葉表皮細胞(為避免原有顏色的干擾,不可使用紫色表皮細胞)
2.取材要點
① 取口腔上皮細胞之前,應先漱口,以避免裝片中出現太多的雜質;
② 取洋蔥表皮細胞時,盡量避免材料上帶有葉肉組織細胞。
3.沖洗載玻片時水的流速要盡量慢,切忌直接用水沖洗。
4.安全要點
① 用酒精燈烘烤載玻片時,不要只集中于材料處,而應將載玻片在火焰上來回移動,使載玻片均勻受熱,以免破裂;
② 烘烤后的載玻片不要馬上放入盛有*的燒杯中,先自然冷卻1分鐘。
5.換用高倍鏡觀察材料時,只能用細準焦螺旋進行調焦,切不可動粗準焦螺旋。
主要步驟(以觀察口腔上皮細胞為例)
1.取材
① 滴: 在潔凈的載玻片上滴一滴質量分數為0.9%的NaCl溶液;
② 刮: 用消毒牙簽在口腔內側壁上輕輕地刮幾下;
③ 涂: 將牙簽上的碎屑涂抹在載玻片的生理鹽水中;
④ 烘: 將涂有口腔上皮細胞的載玻片在酒精燈的火焰上烘干。
2.水解
① 解: 將烘干的載玻片放入裝有30ml質量分數為8%的鹽酸的小燒杯中,進行材料的水解;
② 保: 將小燒杯放入裝有30℃溫水的大燒杯中保溫5分鐘。
3.沖洗涂片
① 沖: 用緩緩的蒸餾水沖洗載玻片10秒鐘;
② 吸: 用吸水紙吸去載玻片上的水分。
4.染色
① 染:用2滴吡羅紅甲基綠混合染色劑滴在載玻片上,染色5分鐘;
② 吸: 吸去多余染色劑;
③ 蓋: 蓋上蓋玻片。
5.觀察
① 低: 在低倍物鏡下,尋找染色均勻,色澤淺的區(qū)域,移至視野*,將物像調節(jié)清晰;
② 高: 轉到高倍物鏡,調節(jié)細準焦螺旋,觀察細胞核和細胞質的染色情況。

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